2021-09
一、概述
? ? ? ?原料藥或者藥物制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法包括化學(xué)法、光譜法、色譜法等。目前有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法主要采用高效液相色譜法，在實(shí)際情況中我們經(jīng)常會(huì)遇到同一個(gè)藥物制劑在不同的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，采用不同的液相方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，而最終會(huì)選擇哪種方法作為產(chǎn)品中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，一般從以下幾個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)：①對(duì)樣品中雜質(zhì)的檢出能力，包括雜質(zhì)的檢出個(gè)數(shù)和檢出量；（同步考察樣品的制備方法是否可行）②對(duì)已知雜質(zhì)的檢出能力和分離能力；③檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇；④方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果是否符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。
二、案例分析
2.1方法介紹
? ? ? 枸櫞酸西地那非片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于USP43和原研廠家標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-010)-2010Z，在這兩個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均采用HPLC法等度洗脫方法且有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法一致。另枸櫞酸西地那非原料藥EP10.0采用的是HPLC法梯度洗脫方法。
? ? ? 2021年04月06日國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了枸櫞酸西地那非片的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)修訂件，其中有關(guān)物質(zhì)的分析方法與EP10.0原料藥有關(guān)物質(zhì)梯度洗脫方法一致，并于2021年10月06日起執(zhí)行。枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法正式由WS1-(X-010)-2010Z的等度洗脫方法升級(jí)為WS1-(X-010)-2010Z-2021梯度洗脫方法。
2.2 USP43與EP10.0有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法雜質(zhì)檢出能力對(duì)比
? ? ? 兩種方法對(duì)同一批樣品檢測(cè)結(jié)果如下：
? ? ??結(jié)果表明，USP43和EP10.0兩種檢測(cè)方法檢測(cè)制劑的有關(guān)物質(zhì)，樣品的制備方法均可行。系統(tǒng)適用性（分離度和靈敏度）均能符合要求，且檢出雜質(zhì)個(gè)數(shù)和雜質(zhì)量相當(dāng)。
2.3 USP43與EP10.0有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法特定雜質(zhì)分離度考察
? ? ? 采用EP10.0的雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G和枸櫞酸西地那非對(duì)照品，配制成單獨(dú)的定位溶液和混合對(duì)照品溶液，在兩種不同的色譜條件下進(jìn)樣，比較兩種方法對(duì)已知雜質(zhì)的雜質(zhì)分離能力。
? ? ? 使用USP43色譜條件進(jìn)行測(cè)定（DAD檢測(cè)器），色譜柱使用Agilent SBC18(5μm，4.6*250nm)，各雜質(zhì)定位溶液和混合對(duì)照品溶液圖譜如下圖。
? ? ? ?使用EP10.0色譜條件進(jìn)行測(cè)定（DAD檢測(cè)器），色譜柱使用Agilent SBC18(5μm，4.6*250nm)，各雜質(zhì)定位溶液和混合對(duì)照品溶液圖譜如下圖。
? ? ? USP43枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)方法，雜質(zhì)F與西地那非峰的出峰時(shí)間相同，雜質(zhì)G洗脫不出來(lái)。EP10.0枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)方法，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G和西地那非均可檢出，且各成分峰間均能達(dá)到基線(xiàn)分離。EP有關(guān)物質(zhì)的梯度洗脫方法對(duì)已知雜質(zhì)的檢出能力和分離能力優(yōu)于USP等度洗脫方法。
2.4 USP43與EP10.0有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)考察
? ? ? 對(duì)USP方法（檢測(cè)波長(zhǎng)290nm）和EP方法（檢測(cè)波長(zhǎng)230nm）進(jìn)行比較，將各雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G和西地那非峰，提取UV光譜，各色譜峰UV光譜如下圖。
? ? ? UV光譜圖顯示各雜質(zhì)在230nm和290nm的響應(yīng)趨勢(shì)保持一致。雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)F和西地那非的響應(yīng)相當(dāng)，雜質(zhì)D和雜質(zhì)C比西地那非響應(yīng)偏高，雜質(zhì)G比西地那非響應(yīng)偏低。但各成分在230nm處的響應(yīng)均高于290nm處的響應(yīng)，即各雜質(zhì)在230nm處均有較大吸收。綜上所述可優(yōu)選230nm波長(zhǎng)作為有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.5分析方法驗(yàn)證
? ? ? 最后，對(duì)EP方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，驗(yàn)證內(nèi)容包括系統(tǒng)適用性、專(zhuān)屬性（選擇性及干擾、強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)）、檢測(cè)限和定量限、線(xiàn)性和范圍、精密度（重復(fù)性和重現(xiàn)性）、準(zhǔn)確度、溶液穩(wěn)定性和耐用性。其中強(qiáng)制降解試驗(yàn)，各破壞樣品所得色譜圖中，西地那非峰與相鄰的降解產(chǎn)物峰分離度≥1.5；各破壞樣品所得色譜圖中，西地那非色譜峰的純度≥995；各破壞樣品物料平衡應(yīng)在95%~105%之間。各項(xiàng)的驗(yàn)證結(jié)果均符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。至此，確定EP方法作為枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。
三、總結(jié)
? ? ? USP43枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)方法，雜質(zhì)F與西地那非峰的出峰時(shí)間相同，雜質(zhì)G洗脫不出來(lái)。雖然從正常樣品檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差別，但對(duì)于后續(xù)穩(wěn)定性樣品檢測(cè)，使用USP43枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)方法檢測(cè)樣品可能會(huì)導(dǎo)致雜質(zhì)F和雜質(zhì)G還有其它強(qiáng)保留降解雜質(zhì)漏檢的可能。因此選擇EP10.0有關(guān)物質(zhì)方法作為枸櫞酸西地那非片有關(guān)物質(zhì)分析方法，最新頒布的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-010)-2010Z-2021同樣選擇了EP10.0方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的控制。
