1.?????? 概述

對于藥品質(zhì)量標準的內(nèi)容，從事分析工作的同學再熟悉不過，性狀、鑒別、檢查、含量測定。其中檢查項基本可分為安全性檢查和有效性檢查，如下：

有效性檢查：項目包括大家熟知的可見異物、不溶性微粒、水分、裝量差異、溶出度、溶出曲線、含量均勻度、殘留溶劑、有關(guān)物質(zhì)等等......

安全性檢查：微生物限度檢查和無菌檢查。

安全性檢查是比有效性檢查的項目更加需要關(guān)注和嚴格制定的。

那么，什么情況下質(zhì)量標準中該制定微生物限度？什么情況下該制定無菌檢查？限度又該如何確定？

2.?????? 什么是微生物限度檢查？

微生物限度（藥典中常見的格式表述）? 取本品，照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）和控制菌檢查法（通則1106）及非無菌藥品微生物限度標準（通則1107）檢查，應符合規(guī)定。

微生物限度檢查法：系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及控制菌檢查。

微生物計數(shù)法：用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數(shù)。其供試品檢查包括三種方法：平皿法（包括傾注法和涂布法）、薄膜過濾法、MPN法，都是根據(jù)計數(shù)方法適用性試驗確定的。MPN法用于微生物計數(shù)時精確度較差，但對于某些微生物污染量很小的供試品，MPN法可能是更適合的方法。

控制菌檢查法：用于在規(guī)定的試驗條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。根據(jù)藥物劑型的不同，包括大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭氏陰性菌、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌。

計數(shù)法適用性試驗：進行產(chǎn)品微生物限度檢查時，應進行計數(shù)方法適用性試驗，以確認采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物限度檢查。進行供試液制備，然后接種和稀釋，各試驗菌應逐一進行微生物回收試驗，微生物的回收可采用平皿法（包括傾注法和涂布法）、薄膜過濾法、MPN法。計數(shù)方法適用性試驗中，釆用平皿法或薄膜過濾法時，試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應在0.5～2范圍內(nèi)；采用MPN法時，試驗組菌數(shù)應在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。若各試驗菌的回收試驗均符合要求，照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。

培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗：供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應進行適用性檢查。供試品的控制菌檢查方法應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。

供試品檢查：按計數(shù)方法適用性試驗確認的計數(shù)方法進行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)。

結(jié)果判斷

需氧菌總數(shù)：指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）。

霉菌和酵母菌總數(shù)：指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括細菌菌落數(shù)）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細菌使霉菌和酵母菌的計數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素(如氯霉素、慶大霉素)的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進行霉菌和酵母菌總數(shù)測定。

控制菌檢查：陽性對照試驗應檢出相應控制菌、陰性對照試驗應無菌生長，檢查結(jié)果以供試品檢查結(jié)果為準。

除中藥飲片外，非無菌藥品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）”檢查；非無菌藥品的控制菌照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法（通則1106）”檢查。各品種項下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標準解釋如下∶

10¹cfu：可接受的最大菌數(shù)為20；

10²cfu：可接受的最大菌數(shù)為200；

10³cfu：可接受的最大菌數(shù)為2000；依此類推。

中藥飲片的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及控制菌檢查照“中藥飲片微生物限度檢查法”（通則1108）檢查；各品種項下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標準解釋如下∶

10¹cfu：可接受的最大菌數(shù)為50；

10²cfu：可接受的最大菌數(shù)為500；

10³cfu：可接受的最大菌數(shù)為5000；

10⁴cfu：可接受的最大菌數(shù)為50000；依此類推。

限度制定

微生物限度的制定，根據(jù)制劑、原料、中藥提取物的不同，標準會有不同：

①制劑是非無菌化學藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標準見表1：

注：1.化學藥品制劑和生物制品制劑若含有未經(jīng)提取的動植物來源的成分及礦物質(zhì)，還不得檢出沙門菌（10g或10ml）。

?? 2.特殊品種如透皮貼劑等，可采用貼為單位，限度標準以貼計。

②非無菌含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標準見表2：

③非無菌藥用原料及輔料的微生物限度標準見表3：

④中藥提取物及中藥飲片的微生物限度標準見表4：

3.?????? 什么是無菌檢查？

制劑通則或品種項下要求無菌及標示無菌的制劑和原輔料應制定無菌限度。包括注射劑、眼用制劑、吸入液體制劑、沖洗劑等，以及用于手術(shù)、嚴重燒傷、嚴重創(chuàng)傷的局部給藥制劑。

無菌（藥典中常見的格式）?? 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，依法檢查（通則1101），應符合規(guī)定。

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。

無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環(huán)境必須達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及受控環(huán)境應定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度確認。隔離系統(tǒng)應定期按相關(guān)的要求進行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗需對試驗環(huán)境進行監(jiān)測。

方法適用性試驗 ?進行產(chǎn)品無菌檢查時，應進行方法適用性試驗，以確認采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。進行菌種和菌液制備，采用薄膜過濾法或直接接種法進行適用性試驗考察。

供試品的無菌檢查 ?無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應采用薄膜過濾法，包括水溶性液體供試品、醇類和油性供試品，或可在水或油性溶劑中溶解的供試品等。供試品無菌檢查的所采用的檢查方法和檢驗條件應與方法適用性試驗確認的方法相同。

薄膜過濾法一般應采用封閉式薄膜過濾器。無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45μm，直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。

直接接種法適用于無法用薄膜過濾法進行無菌檢查的供試品，即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。無菌檢查時兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等。除另有規(guī)定外，每個容器中培養(yǎng)基的用量應符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%。

結(jié)果判斷